细菌电转化法感受态细胞的制备具体步骤

整理：网友3e81e3b 时间：2025-08-21 阅读：11

最近小编收到很多问题，其中一个就是下面小编为大家整理一下关于细菌电转化法感受态细胞的制备具体步骤的步骤，希望这些方法能够帮助到大家。

首先，由-80摄氏度冰箱中保存的菌落划单菌落，过夜培养大约16-20小时，将新鲜的单菌落接种于5ml的SOB培养基的试管中，在37摄氏度180r/min震荡培养过夜。

然后，取培养物500微升转接入含50mlSOB培养基的500ml摇瓶中，在200r/min37摄氏度下振荡培养至OD600约为0.5，将细菌培养物置于冰水混合物中骤冷半小时。

然后，用预冷的50ml离心管于4摄氏度5000r/min下离心五分钟，再收集菌体，将上清液弃去。

然后，用预冷的水轻轻重悬菌液，先加入少量水重悬菌体，然后把水加满，在4摄氏度5000r/min下离心五分钟，弃上清液。

然后，再用10%甘油重复步骤四两遍，在4摄氏度5000r/min下离心五分钟，最后一次倒尽上清液后，用残存管底的甘油悬浮细胞。

最后，分装100微升到数个Eppendorf管中，然后放入液氮中进行中速冻，并保存于-80摄氏度下的冰箱中。

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